转化生长因子-β3基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的：构建含有转化生长因子-β3（Transforming growth factor-β3，TGF-β3）和增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein，EGFP）的腺病毒载体，使其转染兔骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs），并在细胞内得到表达。方法：将含有TGF-β3基因克隆至含有EGFP的穿梭质粒，通过在感受态菌DH5α内同源重组，构建 pAdxsi-EGFP-TGF-β3。PacⅠ酶切线性化pAdxsi-EGFP-TGF-β3转染HEK293细胞，多轮“乒乓感染法”扩增收集 pAdxsi-EGFP-TGF-β3 病毒液，氯化铯梯度离心纯化，PCR和荧光显微镜观察EGFP的表达并检测重组腺病毒液的滴度。测定重组腺病毒液转染 MSCs 细胞转染效率，Western blot检测 TGF-β3 蛋白表达。结果：成功构建携带 TGF-β3和EGFP 的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3，PCR和绿色荧光证实病毒包装成功，并具有感染力，病毒滴度为 2×1010 pfu/ml。Western blot 检测表明Adxsi-EGFP-TGF-β3感染的 兔骨髓MSCs 细胞有效表达 TGF-β3。结论：含有 TGF-β3 和EGFP的腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3构建成功和TGF-β3蛋白在兔骨髓MSCs中有效表达，为进一步研究转染TGF-β3 基因的兔骨髓MSCs 减轻创面愈合后瘢痕组织增生提供实验基础。