改良Dexter法与IMDM培养基培养骨髓基质细胞的比较

背景:体外分离培养骨髓基质细胞,并于骨髓移植后将其注入严重联合免疫缺陷鼠体内,对于促进造血及免疫重建尤为必要.目的:比较骨髓基质细胞在不同培养条件下的生长状况,寻找一种体外分离培养扩增骨髓基质细胞简单而实用的方法.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2006-07/2007-01在太原市中心医院皮肤科实验室完成.材料:人骨髓取自太原市中心医院血液科经筛选的正常骨髓(取材均经患者同意).方法:分离人骨髓单个核细胞,对照组采用改良Dexter法培养:将骨髓单个核细胞用5×10-7mol/L氢化可的松的RPMI1640培养基调整细胞浓度为1×109L-1,以每孔1 mL接种于24孔培养板,培养2 d后全量换液,去除非贴壁细胞,之后每3 d半量换液1次.细胞生长至半融合状态时传代,传两三代后用胰酶消化,收集细胞,液氮冷冻保存.实验组用IMDM培养基培养:用不含氢化町的松的IMDM培养基培养,其余成分及培养条件均与对照组相同.2 d后全量换液,去除非贴壁细胞,之后每4天半量换液1次.传代及收集方法同对照组.主要观察指标:通过倒置显微镜观察细胞贴壁情况、形态变化及增殖状态,MTT比色法检测细胞增殖活性.结果:倒置显微镜下,两组培养细胞在接种24 h后细胞大量贴壁并伸展开,随着培养时间延长,贴壁细胞数量增多,14 d左右细胞铺满板底达融合状态.传代细胞经消化后变形,24 h后恢复原来形态,并贴壁增殖,形态和原代细胞相似,4.0～5.0d后呈融合状态.两种方法培养的骨髓基质细胞增殖活性差异无显著性意义(P>0.05).结论:改良Dexter法及IMDM培养基培养均可使骨髓基质细胞在短期内贴壁及增殖.IMDM培养基由于不需加氢化可的松,故比改良Dexter法更易于操作.

Bone marrow stromal cells cultured by modified Dexter method versus IMDM medium method