山羊干扰素-γ的克隆、原核表达及其抗血清的制备

应用RT-PCR方法从免疫过山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊干扰素-γ（IFN-γ）基因，经序列测定，其开放阅读框架共有501bp，推测其分子质量（MW）为19.327KD。该基因与GenBank发表的山羊干扰素-γ基因序列（U34232）比较，核苷酸序列同源性为99.4%。经SignalP3.0分析表明，前23个氨基酸为信号肽序列。将信号肽序列去除并克隆到原核表达载体pET30a（＋）上，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳，结果表明该基因在大肠杆菌中以包涵体形式融合表达。用ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化并免疫新西兰兔，制备了兔抗山羊IFN-γ多克隆血清。经WesternBlot鉴定，多克隆抗血清可与纯化的山羊IFN-γ蛋白发生特异性反应，说明该重组蛋白具有抗原活性，为我们进一步研究其在疾病诊断和免疫评价方面的应用奠定了基础。