婴幼儿骨髓间充质干细胞体外培养及基本生物学特性的实验研究

目的 建立一种体外分离和培养婴幼儿骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的方法，并探讨其基本生物学特性。方法 麻醉、无菌条件下行胸骨穿刺抽取先天性心脏病婴幼儿骨髓3mL-5mL，经密度梯度离心获得单个核细胞（Percoll分离液，γ为1．073），接种入含10％胎牛血清的低糖DMEM培养液，测定其生长曲线，流式细胞仪检测婴幼儿BMSCs表面标记，并观察其形态、贴壁率、集落形成能力和超微结构的变化。结果 培养的要幼儿BMSCs 3h-4h后开始贴壁，贴壁率为65％-80％；2d-3d可见集落形成；10d左右汇合90％以上。BMSCs随着传代次数增加集落形成率逐渐降低。培养期间细胞形态均一，基本上为梭形成纤维细胞样形态。婴幼儿BMSCs表面标记CD29、CD44、CD71、CD90表达阳性，CD3、CD14、CD34、CD45、HLA-DR不表达。透射电镜观察，婴幼儿BMSCs具有BMSCs典型的超微结构。结论 成功地建立了一种体外分离培养先天性心脏病婴幼儿BMSCs的方法，获得的细胞形态均一，生长稳定，增殖较快，能为体外构建组织工程化先天性心脏病修复材料提供重要的种子细胞的来源。

An Experimental Study on Cell Culture in vitro and Basic Biological Character of Infant Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells