丙型肝炎病毒PCR直接序列分析方法的建立及应用

目的为探讨快速完成丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ（ＨＣＶｃＤＮＡ）序列分析的方法。方法将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析技术相结合，以ＰＣＲ产物为测序模板，以ｒ３２Ｐ－ＡＴＰ标记ＰＣＲ引物为测序引物，以ＴａｑＤＮＡ聚合酶直接测序。结果与结论ＰＣＲ直接测序方法简便、快速、经济。还发现，以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收ＰＣＲ产物制备测序模板可获得最佳测序效果。在需要测定大量标本时，为进一步简化操作步骤，可降低套式ＰＣＲ中第一次扩增反应的ｄＮＴＰ与引物浓度，以第一次ＰＣＲ扩增产物为模板，也可得到较好的测序结果。ＰＥＧ沉淀回收法不能去除非特异性ＰＣＲ产物，对ＰＣＲ直接测序有一定影响。