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| GST-hCAP融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 沈涛,许晓军,李妍,梁爽,薛峰,付勤.GST-hCAP融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达[J].东南大学学报(医学版),2012,31(1):24-28. |
| 作者姓名： | 沈涛 许晓军 李妍 梁爽 薛峰 付勤 |
| 作者单位： | 1. 中国医科大学附属盛京医院,骨科,辽宁,沈阳,110004 2. 中国医科大学基础医学院,细胞生物学教研室,细胞生物学卫生部重点实验室,辽宁,沈阳,110001 3. 明尼苏达大学,实验病理系,美国明尼苏达州,明尼艾波利斯,55455 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30800415);辽宁省科技厅基金(2009225010-15) |
| 摘 要： | 目的:构建GST标签的人c-Cbl相关蛋白(GST-hCAP)融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导其表达.方法:从COS-1细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hCAP基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-5X-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-hCAP,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-hCAP构建成功,用Western blot方法也证实了GST-hCAP融合蛋白的表达.结论:成功地构建了GST-hCAP原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化CAP及研究其结构与功能提供了前提基础. |
| 关 键 词： | c-Cbl相关蛋白 原核表达 融合蛋白 |
Construction and induction of GST-hCAP fusion protein expression in prokaryotic cells |
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| SHEN Tao,XU Xiao-jun,LI Yan,LIANG Shuang,XUE Feng,FU Qin.Construction and induction of GST-hCAP fusion protein expression in prokaryotic cells[J].Journal of Southeast Univ: Medical Sci Ed,2012,31(1):24-28. | |
| Authors: | SHEN Tao XU Xiao-jun LI Yan LIANG Shuang XUE Feng FU Qin |
| Institution: | 1(1.Department of Orthopedic Surgery,Shengjing Hospital Affiliated to China Medical University,Shenyang 110004,China;2.Department of Cell Biology,the Key Laboratory of Cell Biology of Ministry of Education and Public Health of China,College of Basic Medical Sciences,China Medical University,Shenyang 110001,China;3.Department of Laboratory Medicine & Pathology,University of Minnesota,Minneapolis,MN 55455,USA) |
| Abstract: | |
| Keywords: | c-Cbl-associated protein prokaryotic expression fusion protein |
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