| 肝癌细胞外泌体的分离与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈加贵,邓敬桓,何敏.肝癌细胞外泌体的分离与鉴定[J].世界华人消化杂志,2016(5):737-743. |
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| 作者姓名： | 陈加贵 邓敬桓 何敏 |
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| 作者单位： | 广西医科大学公共卫生学院;区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,No.81260445;广西自然科学基金青年基金资助项目,No.2015GXNSFBA139160;区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室基金资助项目,Nos.GK2013-13-A-01-02,GK2014-ZZ04,GK2015-ZZ01~~ |
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| 摘 要： | 目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nanosight技术分析粒径;Western blot分析其特异蛋白Alix、CD63、CD9的表达并利用SDS-PAGE电泳分析肝癌细胞和外泌体的蛋白谱.结果:透射电镜观察到的肝癌细胞外泌体,外形呈圆形或椭圆形;Nanosight技术分析颗粒直径峰值为122 nm,直径30-150 nm之间颗粒占72.16%;Western blot证实在细胞培养上清液和外泌体提取液中均能检测到Alix、CD63、CD9的蛋白表达;SDS-PAGE电泳清晰显示外泌体中高丰度大分子结构蛋白明显少于肝癌细胞.结论:利用连续适应无血清细胞培养结合改良超速离心法能提取高纯度的外泌体,为肝癌细胞外泌体标志物研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 肝癌细胞 外泌体 分离 鉴定 |
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