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| 人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA/IκBα融合蛋白的制备 | |
| 引用本文： | 陈海锋,程远,黄爱龙,刘冰榕.人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA/IκBα融合蛋白的制备[J].中华微生物学和免疫学杂志,2002,22(4):358-361. |
| 作者姓名： | 陈海锋 程远 黄爱龙 刘冰榕 |
| 作者单位： | 1. 重庆医科大学附属二院神经外科 2. 重庆医科大学病毒性肝炎研究所 3. 重庆医科大学附属二院消化内科 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号30070297) |
| 摘 要： | 目的利用基因重组技术构建人IκBα基因原核表达质粒,制备TrxA/IκBα融合蛋白,以便进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体. 方法以重组质粒pGEM-T-IκBα为模板,利用PCR方法扩增出带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的人IκBα基因cDNA,经相应酶切后插入原核表达载体pET-32a(+).重组表达质粒pET32a(+)-IκBα转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达TrxA/IκBα融合蛋白.Western blot试验鉴定表达蛋白.超声波破菌后采用Ni-NTA树脂对TrxA/IκBα融合蛋白进行纯化. 结果酶切鉴定证实人IκBα基因cDNA已插入原核表达载体pET-32a(+).重组表达质粒pET32a(+)-IκBα在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达了TrxA/IκBα融合蛋白,其相对分子质量(Mr)约为56×103,表达量约占细菌总蛋白的25%.Western blot试验显示TrxA/IκBα融合蛋白与兔抗IκBα多克隆抗体呈特异性免疫反应.经Ni-NTA树脂纯化后,TrxA/IκBα融合蛋白的纯度可高达95%以上. 结论人IκBα基因原核表达质粒的构建及TrxA/IκBα融合蛋白的制备为进一步研究IκBα的生物学功能和制备相应抗体奠定了物质基础. |
| 关 键 词： | IκBα基因 TrxA／IκBα融合蛋白 基因重组 原核表达 抗体制备 免疫检测 |
| 修稿时间： | 2001年10月8日 |
The construction of prokaryotic expression plasmid of human IκBα gene and preparation of TrxA/IκBα fusion protein |
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| CHEN Haifeng ,CHENG Yuan,HUANG Ailong,LIU Bingrong.The construction of prokaryotic expression plasmid of human IκBα gene and preparation of TrxA/IκBα fusion protein[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2002,22(4):358-361. | |
| Authors: | CHEN Haifeng CHENG Yuan HUANG Ailong LIU Bingrong |
| Institution: | CHEN Haifeng *,CHENG Yuan,HUANG Ailong,LIU Bingrong. *The Neurosurgery of the Second Affiliated Hospital of Chongqing University of Medical Science,Chongqing 400012,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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