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| 人TIM-3的克隆表达及其单克隆抗体的制备 | |
| 引用本文： | 张胜桃,刘晓军,何培根,金霞,雷小妹,李守新,胡绍先,龚非力,杨东亮. 人TIM-3的克隆表达及其单克隆抗体的制备[J]. 中华风湿病学杂志, 2005, 9(12): 729-732 |
| 作者姓名： | 张胜桃 刘晓军 何培根 金霞 雷小妹 李守新 胡绍先 龚非力 杨东亮 |
| 作者单位： | 1. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院风湿科 2. 华中科技大学生命科学院生物医学光子学教育部重点实验室 3. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院免疫研究所 |
| 摘 要： | 目的 构建人TIM-3融合蛋白原核表达载体，获取蛋白质抗原．制备抗人TIM-3单克隆抗体。方法 通过特异性引物从人外周血单个核细胞中扩增出hTIM-3cDNA，细胞膜外基因克隆到原核表达载体pQEIOOS中，转化到E．coliBL21（DE3），表达并纯化带6个组氨酸的融合蛋白．免疫BALB／c小鼠，应用杂交瘤技术经克隆筛选获得抗人TIM-3单抗的杂交瘤细胞株，以间接酶链反应吸附测定（ELISA）和WesternBlot等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果 人TIM-3cDNA经DNA测序得到证实．成功构建了pQE100S—hTIM-3原核表达载体，表达并纯化了大量蛋白质抗原，获得了1株稳定分泌抗人TIM-3单抗的杂交瘤细胞株（28H12），Western Blot分析证明hTIM-3蛋白在转染的CHO细胞中高表达。结论 成功构建了人TIM-5融合蛋白原核表达载体，表达并纯化了6xHis—hTIM-5融合蛋白．所获单抗能特异识别人TIM-3蛋白，为进一步研究人TIM-3及其配体的功能提供了条件。 |
| 关 键 词： | 抗体 单克隆 TIM-3 克隆 原核表达 |
| 收稿时间： | 2005-06-07 |
| 修稿时间： | 2005-06-07 |
Cloning, expression of human TIM-3 and preparation of its monoclonal antibody against it |
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| ZHANG Sheng-tao,LIU Xiao-jun,HE Pei-gen,JIN Xia,LEI Xiao-mei,LI Shou-xin,HU Shao-xian,GONG Fei-li,YANG Dong-liang. Cloning, expression of human TIM-3 and preparation of its monoclonal antibody against it[J]. Chinese Journal of Rheumatology, 2005, 9(12): 729-732 | |
| Authors: | ZHANG Sheng-tao LIU Xiao-jun HE Pei-gen JIN Xia LEI Xiao-mei LI Shou-xin HU Shao-xian GONG Fei-li YANG Dong-liang |
| Affiliation: | Department of Rheumatology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Antibodies, monoelonal TIM-3 Cloning Prokaryotie expression |
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