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| 去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位的表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定 | |
| 引用本文： | 曹利民,司进,朱荫昌,王炜煜,赵晓蓉,叶庆,李文涵,朱慧芬,沈关心.去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位的表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定[J].中华微生物学和免疫学杂志,2005,25(9):756-761. |
| 作者姓名： | 曹利民 司进 朱荫昌 王炜煜 赵晓蓉 叶庆 李文涵 朱慧芬 沈关心 |
| 作者单位： | 1. 430030,武汉,华中科技大学同济医学院免疫学系,分子与免疫药理研究室 2. 江苏省寄生虫病防治研究所 3. 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规化基金（2002CB513109）;卫生部科研基金（WKJ2004-2-013） |
| 摘 要： | 目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定。方法将ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用纯化的CRDH1对人源噬菌体抗体库进行4轮固相筛选,阳性克隆用表达标记(Trx-His-stag)进行差异筛选。取阳性噬菌体C3感染宿主菌HB2151,37℃振荡培养过夜,终浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE与Westernblot鉴定以及免疫组化鉴定纯化的单链抗体C3与肝细胞结合的特性。结果CRDH1/pET-32c在原核系统经诱导表达出相对分子质量(Mr)约35×103大小的融合蛋白,以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白;经4轮筛选和差异筛选后,有2株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的单链抗体,DNA序列分析表明单链抗体重链基因和轻链基因分别属于人免疫球蛋白VH3家族和VKI家族。噬菌体C3经诱导表达出Mr约28×103大小的融合蛋白,可溶性分泌表达于培养基中;通过Ni2+亲和柱纯化获得单链抗体,ELISA、Westernblot表明单链抗体C3能较好结合rCRDH1,免疫组化显示该单链抗体可与肝癌细胞、肝细胞特异结合。结论成功表达ASGPR并筛选出其人源单链抗体。该单链抗体可与表达的rCRDH1以及肝细胞和肝癌细胞特异性结合,提示对肝脏疾病的靶向治疗有潜在的应用价值。 |
| 关 键 词： | 去唾液酸糖蛋白受体 人源噬菌体抗体库 单链抗体 去唾液酸糖蛋白受体 人源单链抗体 亲和纯化 差异筛选 亚单位 鉴定 H1 Western 噬菌体抗体库 |
| 收稿时间： | 2005-02-05 |
| 修稿时间： | 2005年2月5日 |
Expression and purification of the human asialoglycoprotein receptor H1 subunit and selection of anti-CRDH1 scFv |
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| CAO Li-min,SI Jin,ZHU Yin-chang,WANG Wei-yu,ZHAO Xiao-rong,YE Qing,LI Wen-han,ZHU Hui-fen,SHEN Guan-xin.Expression and purification of the human asialoglycoprotein receptor H1 subunit and selection of anti-CRDH1 scFv[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2005,25(9):756-761. | |
| Authors: | CAO Li-min SI Jin ZHU Yin-chang WANG Wei-yu ZHAO Xiao-rong YE Qing LI Wen-han ZHU Hui-fen SHEN Guan-xin |
| Abstract: | |
| Keywords: | Asialoglycoprotein receptor Human phage antibody library seFv |
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