磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响 |
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作者姓名: | 周恒宇 邓华聪 郑宏庭 蒋文 南静 陈丹燕 |
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作者单位: | 重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016;第三军医大学新桥医院内分泌科,重庆,400037;重庆市中医院急诊科,重庆,400010 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,重庆市自然科学基金 |
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摘 要: | 目的 观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipaae C β1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响.方法 ①设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120 min,以最适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定最适的刺激时间.②以最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化.③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达.④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量.结果 用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01).结论 过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递.
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关 键 词: | 磷脂酶Cβ1 葡萄糖刺激胰岛素分泌 过表达 胰岛素 瞬时转染 |
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