| 编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 马仕坤,钟立,程庆丰,李卫平,青华,李启富.编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体构建及鉴定[J].重庆医科大学学报,2009,34(1). |
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| 作者姓名： | 马仕坤 钟立 程庆丰 李卫平 青华 李启富 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016 |
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| 摘 要： | 目的:构建编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体.为进一步研究其蛋白功能提供工具.方法:穿梭质粒pAdTrack-CMV-PGC1α线性化后与骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重组,筛选并提取重组正确的腺病毒质粒,PacI线性化,脂质体转染293细胞包装出成熟的具有感染活力的腺病毒颗粒,TCID50法测定病毒滴度,Western bloting检测PGC1α蛋白在293细胞的表达.结果:测序及酶切鉴定表明目的基因正确插人穿梭质粒,读码框未发生移位.重组腺病毒扩增后滴度约3×1010TCID50/ml,能在293细胞中表达PGC1α蛋白.结论:利用细菌内同源重组的方法成功构建了编码小鼠PGC1α基因的重组腺病毒载体,并观察到其蛋白表达.
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| 关 键 词： | PGC1α 腺病毒载体 同源重组 |
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