脱水淫羊藿素对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究异戊烯基类黄酮化合物脱水淫羊藿素（AHI）对人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移和凋亡的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株MHCC-97H及人正常肝细胞株L02,分别用0、20、40、80、120、160、200 μg/ml浓度的AHI处理MHCC-97H细胞,用0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml浓度的AHI处理L02细胞。采用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移情况;Hoechst33342实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:经0、20、40、80、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞的存活率分别为（100.00±0.00）%、（97.41±2.10）%、（96.58±3.23）%、（87.72±4.85）%、（78.33±3.76）%、（56.97±2.61）%、（15.25±2.51）%,差异有统计学意义（ F=429.20, P<0.001）;80、120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml AHI处理24 h后,L02细胞存活率分别为（100.00±0.00）%、（96.82±3.79）%、（95.36±3.43）%、（90.79±5.75）%、（77.67±5.66）%、（63.98±5.22）%、（34.22±4.01）%、（33.84±4.41）%,差异有统计学意义（ F=233.20, P<0.001）;100、150、200、400、500 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.05）。AHI处理L02细胞24 h半抑制浓度（IC 50）为（300.20±17.10） μg/ml,明显大于MHCC-97H细胞IC 50（158.60±5.50） μg/ml,差异有统计学意义（ t=13.65, P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞克隆数分别为1 993.00±46.29、1 355.00±54.84、998.33±21.03、218.33±35.95,差异有统计学意义（ F=954.80, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞愈合率分别为（51.68±1.93）%、（16.04±0.73）%、（8.88±0.31）%、（-6.94±0.46）%,差异有统计学意义（ F=1 616.00, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Hoechst33342实验显示,经0 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞于倒置显微镜下显示出均匀的暗蓝色,并呈现出完整的细胞核状态;相较于0 μg/ml,120、160、200 μg/ml AHI处理的细胞出现皱缩、破碎的现象,细胞核形态异常,部分细胞核被染为亮蓝色,且该情况随着浓度的增加愈为明显。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞凋亡率分别为（10.51±0.56）%、（42.23±0.87）%、（61.92±0.52）%、（72.05±0.74）%,差异有统计学意义（ F=4 677.00, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bcl-2蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ F=30.43, P<0.001;F=212.80, P<0.001;F=475.30, P<0.001;F=10.75, P=0.004）;160、200 μg/ml AHI Bax蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Bcl-2蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著降低（均 P<0.05）。 结论:AHI可抑制人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移,并促进其凋亡。