| 抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定 |
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| 引用本文： | 段朝晖,毛越苹,罗晓红,李民友,劳伟思,王英,朱振宇.抗人β-淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定[J].第四军医大学学报,2008,29(9):788-791. |
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| 作者姓名： | 段朝晖 毛越苹 罗晓红 李民友 劳伟思 王英 朱振宇 |
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| 作者单位： | 段朝晖 (中山大学附属第二医院临床免疫实验室,广东,广州,510120)； 毛越苹 (中山大学附属第二医院临床免疫实验室,广东,广州,510120)； 罗晓红 (中山大学附属第二医院临床免疫实验室,广东,广州,510120)； 李民友 (中山大学医学院生物化学教研室,广东,广州,510890)； 劳伟思 (中山大学附属第二医院临床免疫实验室,广东,广州,510120)； 王英 (中山大学附属第二医院临床免疫实验室,广东,广州,510120)； 朱振宇 (中山大学医学院生物化学教研室,广东,广州,510890)； |
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| 基金项目： | 广东省科技厅科技计划，广东省广州市科技计划 |
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| 摘 要： | 目的:运用噬菌体展示技术构建抗人β-淀粉样肽(Aβ)特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定.方法:从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,分离纯化mRNA,经逆转录合成其总cDNA.以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段,再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起,克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07超感染后回收全部重组噬菌体,构建噬菌体抗体库,SDS-PAGE鉴定纯度.结果:经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350bp和325 bp,与预期VH,VL基因片段理论值相符.经重组PCR得到大小约750 bp的ScFv基因片段.ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为1.1×10<'8>的噬菌体抗体库,经SDS-PAGE鉴定,得到M,约为30000 ku,纯度较好的scFv抗体.结论:成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库,为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和治疗应用打下基础.
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| 关 键 词： | 噬菌体展示技术 单链抗体 阿尔茨海默病 β-淀粉样肤 |
| 文章编号： | 1000-2790(2008)09-0788-04 |
| 修稿时间： | 2007年10月11 |
Construction and identification of specific anti-human β-amyloid peptide ScFv by phage antibody library display system |
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| DUAN Zhao-Hui,MAO Yue-Ping,LUO Xiao-Hong,LI Min-You,LAO Wei-Si,WANG Ying,ZHU Zhen-Yu.Construction and identification of specific anti-human β-amyloid peptide ScFv by phage antibody library display system[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2008,29(9):788-791. |
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| Authors: | DUAN Zhao-Hui MAO Yue-Ping LUO Xiao-Hong LI Min-You LAO Wei-Si WANG Ying ZHU Zhen-Yu |
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