| 人层粘连蛋白α4链LG4-5组件的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 连继勤,戴旭芳,张玉静,江渝,何凤田. 人层粘连蛋白α4链LG4-5组件的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 第三军医大学学报, 2005, 27(17): 1729-1731 |
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| 作者姓名： | 连继勤 戴旭芳 张玉静 江渝 何凤田 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038;重庆师范大学特殊教育学院,重庆,400047;解放军军需大学军事兽医系生物化学与分子生物学教研室,长春,130062 |
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| 摘 要： | 目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(human laminin alpha4 LG4-5 module,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白.用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹法检测抗体的特异性.结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1:10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带.结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础.
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| 关 键 词： | hLNα4LG4-5 克隆 表达 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1000-5404(2005)17-1729-03 |
| 收稿时间： | 2004-07-19 |
| 修稿时间： | 2005-01-29 |
Prokaryotic expression and polyclonal antiserum preparation of human laminin al-pha4 LG4-5 module |
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| LIAN Ji-qin,DAI Xu-fang,ZHANG Yu-jing,JIANG Yu,HE Feng-Tian. Prokaryotic expression and polyclonal antiserum preparation of human laminin al-pha4 LG4-5 module[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2005, 27(17): 1729-1731 |
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| Authors: | LIAN Ji-qin DAI Xu-fang ZHANG Yu-jing JIANG Yu HE Feng-Tian |
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