| 应用cDNA RDA联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的方法学分析 |
| |
| 引用本文： | 彭依群 邓小戈 翟木绪 隋国良 王敏 廖二元. 应用cDNA RDA联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的方法学分析[J]. 中国骨质疏松杂志, 2005, 11(4): 413-417 |
| |
| 作者姓名： | 彭依群 邓小戈 翟木绪 隋国良 王敏 廖二元 |
| |
| 作者单位： | 410011,长沙,中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助（39970374）和国家“九五”攻关基金资助（969060505）. |
| |
| 摘 要： | 目的探讨采用cDNA代表性差异分析法（representational difference analysis，RDA）联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇（E2）干预MG-63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNA RDA的内部质控，以干预组扩增子、对照组扩增子和第4轮双向消减产物为模板，行内对照基因GAPDH的RT-PCR进行消减效率分析，Southem杂交证实消减产物来源，快速Northern杂交证实消减产物确实呈差异表达；克隆到pGEM-Teasy载体，转化JM109感受态细菌并铺Amp^＋／X-gal／IPTG琼脂皿得到差异表达文库，随机挑取白色单菌落培养后点成尼龙阵列膜，分别与干预组和对照组扩增子及第4轮消减产物杂交，得到差异表达克隆用于后续研究。结果内部质控结果显示，第3轮消减杂交后，PCR未见差异性产物扩增；cDNA RDA共得到3个雌二醇诱导表达上调条带和2个表达下调条带。Southern杂交结果显示在检测扩增子及第1～4轮差异产物中均可见阳性杂交信号，而驱赶扩增子中无杂交信号；快速Northern杂交证实干预组细胞总RNA的两处杂交信号均较对照组强；阵列膜同一克隆两个点对应的杂交信号呈高度相关一致性，共得到120个差异表达克隆（56个表达上调，64个表达下调）。结论cDNA代表性差异分析法联合cDNA阵列点杂交方法能有效快速高通量筛查E2诱导MG-63差异表达基因。
|
| 关 键 词： | cDNA代表性差异分析法 cDNA阵列 基因表达 方法学 |
| 收稿时间： | 2005-02-21 |
| 修稿时间： | 2005-02-21 |
Analysis of isolating differentially expressed genes through cDNA RDA combined with cDNA arrays |
| |
| PENG Yiqun , DENG Xiaoge , ZHAI Muxu ,et al.. Analysis of isolating differentially expressed genes through cDNA RDA combined with cDNA arrays[J]. Chinese Journal of Osteoporosis, 2005, 11(4): 413-417 |
| |
| Authors: | PENG Yiqun DENG Xiaoge ZHAI Muxu et al. |
| |
| Affiliation: | PENG Yiqun , DENG Xiaoge , ZHAI Muxu , et al . |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | cDNA representational difference analysis(cDNA RDA) cDNA arrays |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国骨质疏松杂志》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国骨质疏松杂志》下载免费的PDF全文 |
