| 稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢细胞株的建立 |
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| 引用本文： | 黄燕,徐索文,刘培庆. 稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢细胞株的建立[J]. 中国动脉硬化杂志, 2011, 19(4) |
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| 作者姓名： | 黄燕 徐索文 刘培庆 |
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| 作者单位： | 中山大学药学院药理毒理实验室,广东省广州市,510006 |
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| 摘 要： | 目的 将GPR109A基因插入pEGFP-N3载体中构建重组质粒pEGFP-GPR109A,并建立稳定表达烟酸受体GPR109A的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞株.方法 构建重组质粒pEGFP-GPR109A,重组质粒转化大肠杆茵DH5a,重组质粒经PCR、酶切、测序验证正确后,应用脂质体转染技术将该质粒导入CHO细胞,用抗生素G418筛选稳定表达的细胞.倒置荧光显微镜观察克隆细胞株荧光信号,RT-PCR检测GPR109A基因mRNA表达,Westem Blotting检测绿色荧光蛋白与烟酸受体GPR109A的融合蛋白(GFP-GPR109A)的表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位.结果 pEGFP-GPR109A真核表达质粒构建正确,融合蛋白GFP-GPR109A在CHO细胞中稳定表达,表达的融合蛋白主要定位于细胞膜.结论 成功构建pEGFP-GPR109A真核表达载体并建立其稳定表达的CHO细胞株;该细胞株的建立有助于GPR109A的更多生理病理功能研究,也为下一步抗动脉粥样硬化的药物筛选奠定了基础.
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| 关 键 词： | 烟酸受体 真核表达载体 分子克隆 中国仓鼠卵巢细胞 |
Establishment of a Chinese Hamster Ovary Cell Line Stably Expressing Nicotinic Acid Receptor GPR109A |
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| HUANG Yan,XU Suo-Wen,LIU Pei-Qing. Establishment of a Chinese Hamster Ovary Cell Line Stably Expressing Nicotinic Acid Receptor GPR109A[J]. Chinese Journal of Arteriosclerosis, 2011, 19(4) |
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| Authors: | HUANG Yan XU Suo-Wen LIU Pei-Qing |
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| Affiliation: | HUANG Yan,XU Suo-Wen,and LIU Pei-Qing(Laboratory of Pharmacology and Toxicology,School of Pharmaceutical Sciences,Sun Yat-sen University,Guangzhou,Guangdong 510006,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nicotinic Acid Receptor Eukaryotic Expression Vectors Molecular Cloning Chinese Hamster Ovary Cells |
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