构建Neuregulin1克隆载体的实验

目的：Schwann细胞具有促进神经元再生的作用，Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应，构建NRG1克隆载体，可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系，对神经损伤模型进行Schwann细胞移植．观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法。方法：实验于2003-09／2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。提取幼龄大鼠脑RNA，反转录聚合酶链反应，用：Xba I和EcoR I对目的基因和载体质粒进行双酶切，T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌，挑取LB(Amp )平板生长克隆菌摇菌扩增，用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因，同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒，进行克隆载体测序。结果：获得一株NRG1克隆质粒。测序结果显示为NRG1新的异构体，用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体。结论：构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体，可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究。