泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究

目的 检测泛素特异性蛋白酶18（USP18）在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性（细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡）的影响。方法 2013年7月—2014年7月选取5种肝癌细胞株（Hep G2、Hep G2.2.15、Hep 3B、Huh-7、SMMC-7721），采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和Western blotting法分别检测USP18 mRNA和USP18表达水平，选择表达活性最强的细胞株进行小干扰RNA（siRNA）转染。利用LipofectamineTM 2000法将USP18 siRNA转染肝癌细胞，分为正常组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组。采用RT-PCR和Western blotting法检测干扰效率，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线，平板克隆形成实验检测克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期，Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 5种肝癌细胞株中USP18 mRNA和USP18表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中Hep 3B肝癌细胞株中USP18 mRNA和USP18表达水平高于其他4种肝癌细胞株（P＜0.05），故选取Hep 3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep 3B肝癌细胞株转染USP18 siRNA后48 h，转染效率达（91.00±5.67）%。5组干扰效率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组干扰效率高于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。转染后1、2、3 d，siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组吸光度低于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组克隆形成率低于正常组和阴性对照组，细胞凋亡率高于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。5组细胞周期分布比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。正常组与阴性对照组吸光度、克隆形成率、细胞周期分布、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 USP18在Hep 3B肝癌细胞株中的表达较高，USP18基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程，增加细胞凋亡。