三氧化二砷聚乙二醇-聚乳酸偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2隐形纳米粒的抗肝癌机制探讨

目的 探讨以聚乙二醇-聚乳酸（PEG-PLA）为载体材料包载的三氧化二砷（As2O3），同时偶联人源抗血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）的隐形纳米粒的抗肝癌机制。方法 以PEG-PLA为载体材料，W/O/W型超声乳化制备As2O3纳米粒，同时偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，得到人源抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA纳米粒，同时以相同方法制作香豆素6（C6）-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA纳米粒。测定纳米粒粒径分布、Zata电位；MTT法计算As2O3、As2O3-PEG-PLA及抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA对Bel 7402肝癌细胞IC50值；采用流式细胞实验和激光共聚焦显微镜实验检测人肝癌Bel 7402细胞摄取C6-PEG-PLA及抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA纳米粒的速度和强度；将18只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为3组，每组分别经尾静脉注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA溶液，给药后12 h处死小鼠，取肿瘤、脾、心、肺、肝、肾等组织，测试其中As2O3浓度；再将另24只肝癌裸鼠采用随机数字表法分为4组，每组分别经尾静脉注射As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA及0.9%氯化钠溶液，给药后第17 d，处死小鼠，计算肿瘤抑制率。结果 抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA平均粒径为（141.9±13.2）nm（PDI=0.23），呈正态分布，Zata电位为（10.2±1.1）mV。As2O3、As2O3-PEG-PLA、抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA的IC50值分别为（1.53±0.22）μmol/L，（2.30±0.18）μmol/L和（1.80±0.22）μmol/L。不同剂型IC50值比较，差异有统计学意义（F=4.503，P=0.018）。不同时间点人肝癌Bel 7402细胞摄取抗VEGFR-2/C6-PEG-PLA的速度均高于C6-PEG-PLA，差异有统计学意义（t=2.012，P=0.045；t=2.231，P=0.035；t=2.311，P=0.022）。As2O3组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F=5.568，P=0.018）；As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F=4.659，P=0.034）；抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA组不同组织As2O3含量比较，差异有统计学意义（F=5.001，P=0.022）。对照组、As2O3组、As2O3-PEG-PLA组和抗VEGFR-2/As2O3-PEG-PLA组肿瘤抑制率分别为32.6%、45.9%、66.2%和87.9%。4组肿瘤抑制率比较，差异有统计学意义（χ2=4.189，P=0.018）。结论 以PEG-PLA为载体材料制备得到As2O3纳米制剂，且偶联具有肝癌靶向作用的VEGFR-2，用于肝癌的治疗，可显著提高As2O3的生物利用度，为构建As2O3肝癌靶向纳米递送系统提供了理论依据。