基于12S基因对中成药中药用乌梢蛇的分子鉴定研究

目的 建立一种适用于中成药中乌梢蛇药材掺伪问题的分子鉴别方法。方法 收集组方有乌梢蛇的中成药11种、乌梢蛇及其混伪品15种。对所有样品进行总基因组DNA提取，基于12S基因片段对乌梢蛇及其混伪品对比分析，根据差异位点设计乌梢蛇通用引物序列、特异引物序列以及荧光定量所用引物和探针，分别采用不同聚合酶链式反应(PCR)方法扩增乌梢蛇药材及中成药中乌梢蛇成分，优化反应体系并对方法进行耐受性和适应性的考察。结果 建立了乌梢蛇的特异性PCR技术，乌梢蛇正品均在200 bp附近处有一清晰条带，其他混伪品无条带。建立荧光定量PCR鉴别方法，适用于DNA含量低的中成药检测。结论 通过特异性引物PCR扩增可以有效鉴别乌梢蛇药材，通过荧光定量PCR检测法可以有效鉴别乌梢蛇药材及中成药中乌梢蛇的真伪问题。方法具有特异、快速、灵敏的特点，为乌梢蛇及中成药中乌梢蛇药材的真伪鉴别提供参考。