| GST-CTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 付晶晶,易丽君,李红.GST-CTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达[J].南昌大学学报(医学版),2015,55(1):1. |
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| 作者姓名： | 付晶晶 易丽君 李红 |
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| 作者单位： | 江西省儿童医院中心实验室 |
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| 摘 要： | 目的构建人CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以pEASY-T1-SIMPLE-CTCF为模板,设计引入限制性酶切位点的CTCF引物,PCR方法扩增目的片段,产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体pGEX-4T-1连接,构建成pGEX-4T-1-CTCF原核表达载体,转化至大肠埃希菌BL21中,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,Western blot检测GST-CTCF融合蛋白的表达情况。结果经菌液PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒pGEX-4T-1-CTCF构建成功,GST-CTCF融合蛋白产物经Western blot鉴定为特异性表达。结论成功构建了pGEX-4T-1-CTCF原核表达质粒,获得特异性的GST-CTCF融合蛋白,为进一步研究转录因子CTCF的功能奠定了基础。更多还原
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| 关 键 词： | CTCF 原核表达载体 谷胱甘肽转移酶 重组蛋白表达 |
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