人Bcl-6 3’UTR区报告质粒及其表达载体的构建和功能检测 |
| |
作者姓名: | 韩白玉 崔瀚之 燕翔 黄鹏 黄华龙 范忠义 窦京涛 |
| |
摘 要: | 目的通过构建bcl-6 基因野生型、突变体3’UTR区及其编码序列(CDS),观察miR-127 对bcl-6 的直接靶向调控作用及 bcl-6表达载体回复miR-127抑制细胞周期和细胞生长的功能。方法利用PCR方法扩增bcl-6基因3’UTR区序列及其CDS,分 别构建在pcDNA3.0-Luc和pcDNA3.0-Flag载体上,在bcl-6基因3’UTR质粒基础上应用重组PCR方法构建miR-127结合位点 突变的突变体报告基因质粒,应用荧光素酶报告基因系统检测miR-127对bcl-6的直接靶向调控作用,在肝癌细胞HepG2中检 测过表达及敲低miR-127引起bcl-6基因表达抑制后细胞周期和细胞生长的改变,同时应用表达载体回复bcl-6蛋白水平,检测 bcl-6在miR-127调控细胞周期和细胞生长中的必要性。结果构建的重组质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确,bcl-6 3’UTR 野生型和突变体报告质粒与miR-127共转293T细胞和HepG2细胞后荧光素酶报告基因检测显示miR-127明显降低野生型报 告质粒的活性,但对突变体活性没有影响,miR-127可引起HepG2细胞G2/M期阻滞并抑制细胞生长,bcl-6可以逆转miR-127 对细胞周期和细胞生长的影响。结论成功构建bcl-6基因3’UTR区野生型、突变体报告质粒和bcl-6基因的表达载体,荧光素酶 报告基因和回复实验证实均具有生物学功能。
|
|
| 点击此处可从《南方医科大学学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《南方医科大学学报》下载免费的PDF全文 |