靶向沉默脂肪酸合酶FASN基因对食管癌细胞失巢凋亡及转移水平的调控作用

目的:探究沉默脂肪酸合成酶(FASN)对食管癌肿瘤细胞失巢凋亡及转移的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定人正常食管上皮细胞系(HEEC)与人食管癌细胞系(CaES-17、EC109、EC9706、KYSE170、TE-1)中FASN mRNA表达水平。实验分为Control组、NC-shRNA组、FASN-shRNA1组、FASN-shRNA2组，分别将慢病毒介导的NC-shRNA、FASN-shRNA1、FASN-shRNA2转染到EC109细胞，倒置显微镜观察绿色荧光表达、qRT-PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测转染效果。应用聚羟乙基异丁烯酸(poly-HEMA)包被培养板模拟各组EC109细胞失巢凋亡，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况，Calcein AM/EthD-1荧光双染法鉴定活细胞与死细胞。免疫荧光染色观察各组EC109细胞内上皮型钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)荧光染色，Western blot测定各组EC109细胞内E-cadherin、Vimentin、锌指转录因子(Snail...