EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组，分别转染Lipofectamine^TM 2000、含无义随机序列（siRNA-NC-PGCsi3.0）和EphA2干扰序列（EphA2-siRNA-PGCsi3.0）质粒和脂质体的复合物。稳定转染后，Brd U法检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力，qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白相对表达量。结果 对照组、空载组、沉默组Brd U阳性率分别为（26.48±2.79）%、（23.52±2.57）%、（13.29±2.06）%，Brd U阳性率组间比较，差异有统计学意义（F =38.560，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组Brd U阳性率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为（83.16±8.31）%、（82.35±7.24）%、（34.24±5.27）%，细胞划痕愈合率组间比较，差异有统计学意义（F =78.869，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组细胞划痕愈合率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为（326.74±33.15）个、（331.27±34.59）个、（126.23±26.18）个，穿膜细胞数组间比较，差异有统计学意义（F =68.997，P =0.000），与对照组、空载组比较，沉默组穿膜细胞数减少（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin mRNA相对表达量升高（P <0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。对照组和空载组上述指标比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用，其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。

Effect and mechanism of EphA2 gene silencing on migration and invasion of human esophageal carcinoma EC9706 cells