| 人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 张庆庆,张森林,朱迎兰,董震,曹罡,陈伟.人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定[J].华西口腔医学杂志,2014,32(3):267-272. |
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| 作者姓名： | 张庆庆 张森林 朱迎兰 董震 曹罡 陈伟 |
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| 作者单位： | 1.南方医科大学南京临床医学院口腔科；2.南京军区南京总医院口腔科，南京 210002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学青年基金资助项目（81102051）；江苏省自然科学基金面上资助项目（BK2011659） |
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| 摘 要： | 目的 构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法 针对人Notch-1基因序列，按照RNAi序列设计原则，设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3），通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接，将Notch-1基因序列插入慢病毒载体pLenOR-THM，构建pLenOR-THM-Notch-1重组载体。质粒转化感受态DH5α细菌，筛选阳性克隆，经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞，进行慢病毒包装并测定病毒滴度，观察感染效率。各组病毒载体转染ACC-M细胞后，运用定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果 成功构建慢病毒载体pLenOR-THM-Notch-1，四质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光；浓缩后的病毒滴度为5.8×108 TU·mL-1；以复感染系数为1时感染293T细胞，感染效率在90％以上。QRT-PCR和Western blot检测结果表明，pLenOR-Notch-1-shRNA3组受抑制程度最高。结论 成功构建了人Notch-1 RNAi慢病毒载体。
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| 关 键 词： | Notch-1基因 慢病毒载体 RNA干扰 |
Construction and identification of a lentiviral vector of RNA interference containing human Notch-1 gene |
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| Zhang Qingqing,Zhang Senlin,Zhu Yinglan,Dong Zhen,Cao Gang,Chen Wei.Construction and identification of a lentiviral vector of RNA interference containing human Notch-1 gene[J].West China Journal of Stomatology,2014,32(3):267-272. |
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| Authors: | Zhang Qingqing Zhang Senlin Zhu Yinglan Dong Zhen Cao Gang Chen Wei |
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| Institution: | 1. Dept. of Stomatology, Nanjing School of Clinical Medicine, Southern Medical University, Nanjing 210002, China; 2. Dept. of Stomatology, Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command, Nanjing 210002, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Notch-1 gene lentiviral vector RNA interference |
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