小凹蛋白1上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导一氧化氮合酶激活的机制

目的 探讨小凹蛋白1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活的作用机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞,取同代细胞随机分为:(1)对照组；(2)钙敏感受体激动剂精胺(2.0 rmmol/L)+ Ca2+组；(3) Caveolae结构破坏剂(Filipin,1.5 mg/L)+精胺+Ca2+组；(4) Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组；(5)空质粒+精胺+ Ca2组；(6) Filipin不同浓度(1.5、2.0、2.5 mg/L)组.免疫印迹检测人脐静脉内皮细胞中eNOS和磷酸化eNOS (p-eNOS)、Cav-1以及eNOS膜蛋白表达；免疫荧光和免疫共沉淀技术检测Car-1和eNOS表达、共定位以及相互作用.结果 不同浓度Filipin不影响eNOS和p-eNOS蛋白表达(P＞0.05)；精胺作用下细胞内p-eNOS表达增加(P＜0.05),此作用可被Filipin(1.5 mg/L)或Car-1基因沉默完全阻断(P ＜0.05)；Fili-pin(1.5 mg/L)或Cav-1干扰处理后,eNOS的膜蛋白表达减少(P＜0.05),eNOS的蛋白表达无变化(P＞0.05)；免疫荧光双标显示Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默后eNOS在小凹定位减少,核周边局部区域聚集增多.与对照组和精胺+ Ca2+组比较,Cav-1 ShRNA处理组Cav-1和eNOS相互作用减弱(P＜0.05),其他处理组间的相互作用无统计学意义(P＞0.05).结论 人脐静脉内皮细胞中Cav-1上调钙敏感受体介导eNOS激活作用机制可能与Cav-1影响eNOS质膜定位及抑制eNOS向细胞器转位有关.

Mechanisms of Caveolin-1 Up-regulating the Extracellular Ca2+-Sensing Receptor Mediated Endothelial Nitric Oxide Synthetase Activation in Human Umbilical Vein Endothelial Cells