| 血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定 |
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| 引用本文： | 韩焱福,宋建星,刘军. 血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2008, 12(24): 4651-4654 |
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| 作者姓名： | 韩焱福 宋建星 刘军 |
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| 摘 要： | 目的:基因重组腺病毒具有较高的转染率,且宿主范围广.实验拟构建携带人血管内皮细胞生长因子165基因的重组腺病毒载体(Ad.VEGF165),为后续基因转染、微囊化基因工程细胞及其动物模型研究提供实验基础.方法:实验于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所实验室完成(国家级重点实验室).①实验材料:pAxCAwt.VEGF165由长海医院胸心外科研究所惠赠.②实验方法:采用脂质体转染法,将pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC共转染人胚肾293细胞,扩增后获得载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷犁重组腺病毒.⑧实验评估:应用聚合酶链反应及酶切证实重组腺病毒中的目的基因.并根据50%组织培养感染剂量法计算病毒滴度.结果:①重组腺病毒Ad.VEGF165的构建:采用脂质体法可使pAxCAwt.VEGF165与DNA-TIC有效转染人胚肾293细胞,扩增出载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒.②重组腺病毒Ad.VEGFl65的鉴定:聚合酶链反应的产物进行Nco I酶切鉴定,可得到597 bp、146 bp 2个片段,与GeneTool软件理论上计算的结果完全一致,计算病毒滴度为2.2×1015pfa/L.结论:采用pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC系统经脂质体转染法成功构建的复制缺陷的重组腺病毒Ad.VEGF165滴度高、毒性低、效率高、体外转染安全.
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| 关 键 词： | 血管内皮细胞生长因子 腺病毒 粘粒 同源重组 基因治疗 组织构建 血管内皮细胞生长因子 基因重组 病毒 gene endothelial growth factor vascular human containing recombinant adenovirus identification 安全 体外转染 效率 毒性低 系统 完全 软件理论 酶切鉴定 复制缺陷型 脂质体法 |
Construction and identification of recombinant adenovirus containing human vascular endothelial growth factor 165 gene |
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| Han Yan-fu,Song Jian-xing,Liu Jun. Construction and identification of recombinant adenovirus containing human vascular endothelial growth factor 165 gene[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2008, 12(24): 4651-4654 |
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| Authors: | Han Yan-fu Song Jian-xing Liu Jun |
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