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| 人MCHR2基因shRNA真核表达载体构建及鉴定 | |
| 引用本文： | 袁成福,杨俊霞,魏丽丽,刘革力,石华,陈济,易发平,马永平,宋方洲.人MCHR2基因shRNA真核表达载体构建及鉴定[J].解放军医学杂志,2007,32(4):355-358. |
| 作者姓名： | 袁成福 杨俊霞 魏丽丽 刘革力 石华 陈济 易发平 马永平 宋方洲 |
| 作者单位： | 1. 400016,重庆,重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室;湖北民族学院医学院生物化学厂研究室 2. 400016,重庆,重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室 3. 400016,重庆,重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室;教育部临床检验诊断学重点实验室 |
| 摘 要： | 目的 构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的shRNA真核表达载体,并在人胚肾293(HEK293)细胞中观察其对MCHR2基因表达的影响.方法 根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.用脂质体将重组质粒转染到HEK293细胞中,观察其在mRNA和蛋白水平对MCHR2的影响.结果 通过酶切鉴定和序列测定,成功构建四条表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞株中.四条shRNA真核表达载体在mRNA水平对MCHR2抑制率分别为54.9%、66.4%、56.9%、45.8%;在蛋白水平对MCHR2抑制率分别为62.0%、81.0%、73.3%、44.2%.结论 针对人MCHR2的shRNA真核表达载体成功构建及鉴定为进一步研究MCHR2功能奠定了良好的基础. |
| 关 键 词： | 基因 MCHR2 短发夹RNA 真核表达载体 细胞转染 基因 shRNA 真核表达载体构建 human targeting sections vectors eukaryotic expression identification 功能 研究 抑制率 蛋白水平 细胞株 质粒转染 阴性对照 短发夹 酶切鉴定 结果 mRNA |
| 收稿时间： | 2006-12-31 |
| 修稿时间： | 2007-02-28 |
Construction and identification of eukaryotic expression vectors expressing shRNA sections targeting human MCHR2 |
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| Yuan Chengfu, Yang Junxia, Wei Lili,et al..Construction and identification of eukaryotic expression vectors expressing shRNA sections targeting human MCHR2[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2007,32(4):355-358. | |
| Authors: | Yuan Chengfu Yang Junxia Wei Lili |
| Institution: | Department of biochemistry and molecular biology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | genes MCHR2 short hairpin RNA eukaryotic expression vector cell transfection |
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