| 肠上皮细胞中性氨基酸载体B0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立 |
| |
| 引用本文： | 黄骞,钮凌颖,王斌,朱维铭,李宁.肠上皮细胞中性氨基酸载体B0AT1的真核表达及稳定转染体系的建立[J].肠外与肠内营养,2009,16(5). |
| |
| 作者姓名： | 黄骞 钮凌颖 王斌 朱维铭 李宁 |
| |
| 作者单位： | 南京军区南京总医院,解放军普通外科研究所,江苏南京,210002 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金课题 |
| |
| 摘 要： | 目的: 构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株. 方法: 提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coli DH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达. 结果: 从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因.酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞,可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系.氨基酸摄取实验证实,转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性. 结论: 重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达.
|
| 关 键 词： | 中性氨基酸载体 肠上皮细胞 克隆 基因表达 |
Construction of recombinant eukaryotic expression plasmid containing human neutral amino acid transporter B0AT1 gene and establishment of stably transfected Hela cell lines |
| |
| HUANG Qian,NIU Ling-ying,WANG Bin,ZHU Wei-ming,LI Ning.Construction of recombinant eukaryotic expression plasmid containing human neutral amino acid transporter B0AT1 gene and establishment of stably transfected Hela cell lines[J].Parenteral & Enteral Nutrition,2009,16(5). |
| |
| Authors: | HUANG Qian NIU Ling-ying WANG Bin ZHU Wei-ming LI Ning |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
