用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS／S基因

目的探讨利用Ｋｌｅｎｏｗ大片段对ＤＮＡ末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 ＢａｍＨＩ、ＸｂａｌＩ消解载体 ｐｃＤＮＡ３，用 ＢｇｌＨ、Ｈｉｎｄ Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 ＨＢＶｐｒｅＳ／Ｓ基因片段。 ｐｃＤＮＡ３的 ＸｂａｌＩ及 ｐｒｅＳ／Ｓ基因的 Ｈｉｎｄ Ⅲ切口端经 Ｋｌｅｎｏｗ大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰 后的ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段与ｐｃＤＮＡ３并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示ｐｒｅＳ／Ｓ基因被定向克隆于载 体ｐｃＤＮＡ３的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配ＤＮＡ粘性末端的较好选择。