三氧化二砷及其不同浓度对角膜基质细胞增殖和移行的影响

目的:观察不同浓度三氧化二砷对体外培养的兔角膜基质细胞增殖和移行的影响。方法:实验于2004-11/2005-04在哈尔滨医科大学肿瘤研究所完成。实验动物为健康日本大耳白兔2只,取其角膜用组织块培养法培养原代及传代得兔角膜基质细胞,将传至2～3代的兔角膜基质细胞用于实验。向实验细胞中分别加入含不同浓度(100,50,25,12.5,10,6.25,5,2.5,1.25,0.625μmol/L)的三氧化二砷培养液,同时以加入不含三氧化二砷的培养液作为阴性对照,以加入含0.0025%丝裂霉素的培养液作为阳性对照。用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法检测三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响,用缺损闭合法观察三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响。结果:实验纳入大耳白兔2只,取其4只角膜培养传至二三代的角膜基质细胞均无污染,细胞数量足够实验所需。①细胞计数法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响:低浓度的三氧化二砷(<12.5μmol/L)对角膜基质细胞增殖无明显抑制作用,而高浓度的三氧化二砷(≥12.5μmol/L)对角膜基质细胞的增殖具有明显的抑制作用,抑制率均在50%以上,且抑制作用随浓度的增加而增强。台盼兰染色显示各组细胞存活率均在90%以上,未见细胞毒性。②四甲基偶氮唑盐法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响:四甲基偶氮唑盐法检测结果与细胞计数法基本一致,三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强。与阳性对照比较,给予25,50,100μmol/L三氧化二砷的角膜基质细胞在加药后6d其增殖抑制率明显降低(56.4%,45.4%,50.2%,55.4%,P<0.05)。③三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响:给予低浓度的三氧化二砷(<25μmol/L)及阴性对照药的角膜基质细胞在用药后48h已有较多的细胞长入,4d后完全闭合,而给予高浓度三氧化二砷的角膜基质细胞在用药后48h只有极少数细胞长入缺损区,8d后仍未见缺损闭合,缺损闭合的时间明显延长。结论:三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强,高浓度的三氧化二砷具有抑制兔角膜基质细胞增殖和移行的作用,而低浓度的三氧化二砷此种作用不明显。三氧化二砷的浓度在100μmol/L以下时,对角膜基质细胞无明显的毒性反应。

Effect of different concentration arsenic trioxide on the proliferation and migration of corneal stromal cells