| CENPK基因过表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 吴伟刚,刘妙娜,刘利平. CENPK基因过表达载体的构建及鉴定[J]. 中国肿瘤, 2015, 24(6): 505-509 |
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| 作者姓名： | 吴伟刚 刘妙娜 刘利平 |
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| 作者单位： | 广东医学院附属深圳市第三人民医院,深圳市肝病研究所,深圳市感染免疫重点实验室,广东深圳518112 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81372227）；深圳市科技计划项目（CXZZ20130515163643) |
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| 摘 要： | [目的]构建着丝粒蛋白K (cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定.[方法]①从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到pCMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体pCMV-CENPK;②利用脂质体法将构建好的pCMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;(③通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定.[结果]①经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-CENPK.②通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达.[结论]成功构建真核表达载体pCMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | CENPK基因 过表达 真核表达载体 肝癌FOCUS细胞 |
| 收稿时间： | 2014-09-10 |
Construction and Identification of CENPK Gene Overexpressed Vector |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CENPK gene overexpression eukaryotic expression vector hepatoma FOCUS cells |
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