| pGEX-4T-2-TK原核表达质粒的构建及其表达 |
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| 引用本文： | 钟俐强,杨斯皓,贾钰铭,吴敬波.pGEX-4T-2-TK原核表达质粒的构建及其表达[J].重庆医学,2010,39(9). |
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| 作者姓名： | 钟俐强 杨斯皓 贾钰铭 吴敬波 |
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| 作者单位： | 四川省宜宾市第二人民医院肿瘤科,644000;四川省宜宾市第二人民医院肿瘤科,644000;四川省宜宾市第二人民医院肿瘤科,644000;四川省宜宾市第二人民医院肿瘤科,644000 |
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| 基金项目： | 四川省卫生厅科研课题 |
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| 摘 要： | 目的 构建含胸苷激酶基因(TK自杀基因)的pGEX-4T-2-TK原核表达质粒,观察其在大肠杆菌中表达情况,为肿瘤基因治疗奠定基础.方法 聚合酶链式反应(PCR)扩增TK基因片段,利用限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ将其连接至原核表达载体pGEX-4T-2内,再将连接产物转化入大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序.将转化正确的大肠杆菌培养过夜,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后观察蛋白表达情况.结果 TK基因片段成功连接至载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的目的 蛋白.结论 pGEX-4T-2-TK原核表达质粒构建成功,为后续肿瘤基因治疗研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 自杀基因 质粒构建 聚合酶链式反应 |
Construction and expression of pGEX-4T-2-TK plasmid in procaryote |
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