| 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证 |
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| 引用本文： | 吴 燕,刘北忠,王 翀,钟 梁,朱 丹,王春光,金丹婷.带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证[J].第二军医大学学报,2010,31(5):468-471. |
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| 作者姓名： | 吴 燕 刘北忠 王 翀 钟 梁 朱 丹 王春光 金丹婷 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家中医药管理局面上项目，重庆医科大学课题 |
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| 摘 要： | 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
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| 关 键 词： | 维甲酸受体α 核定位信号 谷氨酸氨连接酶 蛋白质相互作用 双杂交系统技术 免疫共沉淀 |
| 收稿时间： | 2009/11/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/4/19 0:00:00 |
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