| 血凝素蛋白裂解位点对H5亚型禽流感病毒侵入细胞的影响 |
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| 引用本文： | 刘华雷,王志亮,周滨,陈溥言. 血凝素蛋白裂解位点对H5亚型禽流感病毒侵入细胞的影响[J]. 中国预防医学杂志, 2006, 7(5): 369-373 |
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| 作者姓名： | 刘华雷 王志亮 周滨 陈溥言 |
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| 作者单位： | 1. 农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032
2. 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,210095 |
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| 摘 要： | 目的通过RT—PCR反应获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因（HA）并克隆到真核表达载体pcDNA3上，通过转染293T细胞进行了瞬时表达验证。方法采用PCR定点突变技术，将其HA基因裂解位点的氨基酸组成由RKKR↓GLF突变为RSSR↓GLF，使其具有低致病性AIV的分子特征，并构建了表达突变后HA基因的真核表达载体pcDNA—Hm。将pcDNA—H5和pcDNA—Hm分别与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHTT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的人胚肾细胞293T后，收集转染细胞上清，通过Western—blot和细胞感染性实验来研究假病毒的特性。用缺乏囊膜蛋白和已经证实可以形成MuLV假病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G作为对照。结果转染后形成假病毒进行裂解后进行Westem—blot证明两种HA蛋白都能够整合到各自的假病毒颗粒表面，野生型的HA可以检测到三条带，分别与HA0、HA1和HA2大小相符，而突变后的HAm则仅能检测到一条带，与HA前体大小相符，说明其失去了裂解活性。通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后发现野生型的HA所形成的假病毒MuLV—H5具有感染性和泛嗜性，而突变后的HA所形成的假病毒则失去了感染性。结论可以得出HA蛋白裂解位点的氨基酸组成不仅对H5亚型禽流感病毒的致病性有影响，对禽流感病毒侵入细胞也具有至关重要的作用。
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| 关 键 词： | 鼠白血病病毒 禽流感病毒 H5N1亚型 血凝素 假病毒 裂解位点 |
| 收稿时间： | 2006-05-18 |
| 修稿时间： | 2006-05-18 |
Influence of the Cleavage Site for Hemagglutinin Protein on the Cellular Entry of H5 Subtype Avian Influenza Virus |
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| HU Hun - lei, WANG Zhi - liang, ZHOU Bin, et al. Influence of the Cleavage Site for Hemagglutinin Protein on the Cellular Entry of H5 Subtype Avian Influenza Virus[J]. China Preventive Medicine, 2006, 7(5): 369-373 |
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| Authors: | HU Hun - lei WANG Zhi - liang ZHOU Bin et al |
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| Affiliation: | China Animal Heolthy and Epidemiology Center, Oingdao 266032, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Murine leukemia virus Avian influenza virus ttSN1 subtype Hemagglutinin gene Pseudotype |
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