| 人Toll样受体2胞外区基因重组腺病毒的制备及鉴定 |
| |
| 引用本文： | 孙守勋,李强,刘静,蒲晓允.人Toll样受体2胞外区基因重组腺病毒的制备及鉴定[J].解放军医学杂志,2009,34(4). |
| |
| 作者姓名： | 孙守勋 李强 刘静 蒲晓允 |
| |
| 作者单位： | 第三军医大学新桥医院检验科,重庆,430037 |
| |
| 基金项目： | 全军面上项目，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建含有人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因的重组腺病毒载体并进行鉴定.方法 应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增TLR2胞外区全长基因,克隆人pMD18-T载体并经测序验证后,通过KpnⅠ和HindⅢ双酶切将目的 片段定向克隆至经相同处理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒中.将构建止确的重组质粒pAdTrack-CMV-TLR2用Pme Ⅰ酶切线性化后转化感受态AdEasier-1细菌,在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒.将鉴定正确的重组质粒pAd-TLR2经PacⅠ酶切线性化后,以脂质体法转染至293细胞中进行包装并扩增病毒.观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并测定病毒滴度,用PCR法鉴定重组腺病毒.结果 RT-PCR扩增得到的目的 基因片段与GenBank中的序列一致,经酶切鉴定及PCR检测证实携带人TLR2胞外区全长基因的重组腺病毒制备成功,获得高滴度(3×109pfu/ml)的重组腺病毒.结论 成功制备了表达人TLR2胞外区基因的重组腺病毒,为后续研究奠定了基础.
|
| 关 键 词： | Toll样受体2 腺病毒科 同源重组 |
Preparation and identification of recombinant adenovirus containing the Toll-like receptor 2 extracellular domain gene of human |
| |
| SUN Shou-xun,LI Qiang,LIU Jing,PU Xiao-yun.Preparation and identification of recombinant adenovirus containing the Toll-like receptor 2 extracellular domain gene of human[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2009,34(4). |
| |
| Authors: | SUN Shou-xun LI Qiang LIU Jing PU Xiao-yun |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
