骨组织工程再血管化种子细胞来源：兔肾微血管内皮细胞体外培养及其细胞表型的研究

背景：在骨组织工程研究中，面临从体外实验过渡到体内成骨时如何快速血管化的问题，尽早建立血运才能保留组织工程骨的成骨优势。在体外短时间内能大量扩增且纯度较高的细胞，才能成为组织工程化骨再血管化理想的种子细胞。目的：探索肾微血管内皮细胞的体外培养方法，并对其进行鉴定和表型研究，拟为骨组织工程再血管化提供理想的种子细胞。设计：单一样本研究。单位：苏州大学附属儿童医院骨科。苏州大学生命科学院生物技术研究所。材料：实验于2003-05／2004-04在苏州大学附属儿童医院骨科实验室完成。实验材料为C02培养箱，M199，胎牛血清，Ⅳ型胶原酶，40g／L多聚甲醛，20g／L戊二醛，EGGF，鼠抗人第八因子单克隆抗体(抗FⅧ-RAg)，多标记免疫分析系统(1420，WALLAC BLCTOR^2)，离心机，倒置显微镜，免疫荧光显微镜等。方法：采用三步梯度筛网法，先获得较高纯度的肾血管球，再应用肾血管球外植法体外培养肾微血管内皮细胞。进一步对肾微血管内皮细胞进行免疫组化法的Ⅷ因子相关抗原鉴定，用透射电镜观察细胞浆Weibel-Palade小体，以及采用间接免疫荧光法检测CD31，CD34及CD44表达。主要观察指标：肾微血管内皮细胞形态、活性及表型。结果：体外培养出纯度很高的血管内皮细胞并培养了11代。此外，免疫组化显示Ⅷ因子相关抗原阳性，电镜下观察到Weibel-Palade小体，以及间接免疫荧光检出CD31，CD34表达阳性，而12D44阴性。结论：本实验方法可成功培养出肾微血管内皮细胞，且后者表达CD31，CD34细胞表型。