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| 腺病毒介导小鼠神经生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 池君,宋武战,张学渊. 腺病毒介导小鼠神经生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 听力学及言语疾病杂志, 2007, 15(6): 469-471,I0002 |
| 作者姓名： | 池君 宋武战 张学渊 |
| 作者单位： | 1. 成都军区昆明总医院耳鼻咽喉科,昆明,650032 2. 成都军区昆明总医院核医学科 3. 第三军医大学西南医院耳鼻咽喉科 |
| 摘 要： | 目的构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerve growth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在骨髓间充质干细胞中的表达特性。方法利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mRNA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌BJ5183中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF;在HEK293(人胚肾293细胞)细胞中包装成为有感染能力的、能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒。用病毒感染原代培养的人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem-cells,MSCs),荧光显微镜下观察病毒感染效率,免疫细胞化学法检测细胞中βNGF的蛋白表达,蛋白质免疫印迹法检测培养上清中NGF的分泌。结果成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-mβNGF构建成功。荧光显微镜下观测到感染病毒的细胞胞体发出明亮的绿色荧光,细胞中βNGF免疫染色阳性,培养上清中检测有NGF分泌。结论重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导入骨髓间充质干细胞中,并能正确转录、翻译和分泌,为骨髓间充质干细胞在内耳基因干预的研究中奠定基础。 |
| 关 键 词： | 神经生长因子 腺病毒 骨髓间充质干细胞 基因干预 |
| 文章编号： | 1006-7299（2007）06-0469-03 |
| 收稿时间： | 2007-02-08 |
| 修稿时间： | 2007-02-08 |
Construction of Recombinant Adenoviral Vector Carrying Mus-βNGF Gene and Its Expression in the MSCs |
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| Chi Jun,Song Wuzhan,Zhang Xueyuan. Construction of Recombinant Adenoviral Vector Carrying Mus-βNGF Gene and Its Expression in the MSCs[J]. Journal of Audiology and Speech Pathology, 2007, 15(6): 469-471,I0002 | |
| Authors: | Chi Jun Song Wuzhan Zhang Xueyuan |
| Affiliation: | Department of Otorhinolaryngology, Kunming General Hospital of Cheng du Command,Kunming,650032,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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