| 重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在小鼠成肌细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 杨民,蔡善保,马庆军,郭均,党耕町. 重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在小鼠成肌细胞中的表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2005, 9(6): 56-58 |
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| 作者姓名： | 杨民 蔡善保 马庆军 郭均 党耕町 |
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| 作者单位： | 北京大学第三医院骨科,北京市,100083 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金课题(30170947)~~ |
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| 摘 要： | 目的:构建重组人骨形态发生蛋白7的腺病毒载体(AdBMP7),并观察其在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况。方法:实验于2004-05/10在北京大学医学部完成。RT-PCR方法从HKE293细胞中克隆出hBMP7cDNA并亚克隆入穿梭质粒pAdtrackcmv中,构建pAdtrackcmv-hBMP7质粒。该质粒和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组后挑选阳性重组体pAd-hBMP7质粒。线性化pAd-hBMP7质粒转染293A细胞后检测病毒噬斑形成情况,并于转染后9d收获病毒,大量扩增并制备高纯度、高滴度的AdBMP7。将AdBMP7按MOI=100来感染C2C12细胞,48h后分别应用RT-PCR和免疫组化方法来检测hBMP7在mRNA和蛋白水平的表达。结果:成功克隆出hBMP7cDNA,酶切鉴定pAdtrackcmv-hBMP7和pAd-hBMP7质粒正确重组,获得纯化后滴度达到5×1012vp/mL的AdBMP7。AdBMP7能有效感染C2C12细胞并表达hBMP7蛋白。结论:应用AdEasy-1腺病毒载体系统可在短期内制备高滴度的携带GFP和hBMP7的重组腺病毒AdBMP7,并在为进一步研究BMP7基因治疗促进骨愈合打下基础。
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| 关 键 词： | 骨折愈合 骨形态发生蛋白质类 腺病毒 人 基因治疗 |
| 文章编号： | 1671-5926(2005)06-0056-03 |
| 修稿时间： | 2004-11-01 |
Construction of the recombinant adenoviral vector carrying human bone morphogenetic protein-7 cDNA and its expression in myoblasts of rats |
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| Yang Min,Cai Shan-bao,Ma Qing-jun,Guo Jun,Dang Geng-ting. Construction of the recombinant adenoviral vector carrying human bone morphogenetic protein-7 cDNA and its expression in myoblasts of rats[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2005, 9(6): 56-58 |
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| Authors: | Yang Min Cai Shan-bao Ma Qing-jun Guo Jun Dang Geng-ting |
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