人肺泡上皮细胞A549中细胞间粘附分子1的siRNA构建探讨

【摘要】〓目的〓构建A549细胞中细胞间粘附分子 1（ICAM 1）的小干扰RNA，探讨ICAM 1特异性siRNA能否抑制LPS诱导A549细胞ICAM 1的表达。方法〓采用化学合成法构建A549细胞ICAM 1的小干扰RNA。LPS诱导A549细胞ICAM 1表达，用RT PCR和流式细胞仪分别从mRNA和蛋白水平检测ICAM 1的表达。使用阳离子脂质体Lipofectamin2000转染 ICAM 1siRNA到A549细胞，再用LPS刺激A549细胞，RT PCR和流式细胞仪分别检测RNA干扰A549细胞后ICAM 1的mRNA和蛋白表达。结果〓LPS可以诱导A549细胞ICAM 1的表达，但LPS浓度过大损伤细胞。10 ng/ml的LPS组和100 ng/ml的LPS组OD值相比，两组OD值之间差异有显著性(P ＜0001)。10 ng/ml的LPS作用A549细胞8 h左右，细胞无明显损伤；10 ng/ml LPS作用A549细胞1h后，ICAM 1 mRNA的表达上调（P ＜005），而ICAM 1蛋白水平增加不明显；10 ng/ml LPS作用A549细胞4h后，ICAM 1 mRNA表达水平明显增加（P ＜005），ICAM 1蛋白水平也增加明显。通过化学合成法构建ICAM 1的siRNA，筛选出最优siRNA。转染 ICAM 1siRNA后，LPS刺激A549细胞的ICAM 1的mRNA和蛋白表达水平增加不明显。结论〓通过化学合成法构建的ICAM 1siRNA，可以有效地干扰ICAM 1的表达，ICAM 1siRNA降低了LPS诱导的ICAM 1的表达。

Suppression of ICAM1 in alveolar epithelial cells by small interfering RNA