荧光定量RT-PCR检测诺如病毒基因Ⅱ型方法的建立和评估 |
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作者姓名: | 夏体娇 金敏 陈照立 王景峰 谌志强 邱志刚 李君文 |
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作者单位: | 军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津,300050 |
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基金项目: | 国家自然基金重点项目,军队"十二五"面上项目 |
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摘 要: | 目的 建立灵敏、特异的诺如病毒基因Ⅱ型的荧光定量RT-PCR方法,用于临床腹泻粪便样本病毒的定量检测.方法 构建质粒DNA,并转录合成RNA作为标准品,建立和优化诺如病毒基因Ⅱ型荧光定量RT-PCR方法和反应体系,评价该方法的灵敏度、特异性、重复性,并进行临床粪便样本的检测.结果 此方法最低可以检出102拷贝数/μl,能特异地检出诺如病毒基因Ⅱ型,与诺如病毒基因Ⅰ型无交叉反应,与柯萨奇病毒B组、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒、星状病毒、甲肝病毒、埃可病毒和轮状病毒无交叉反应.针对标准品,2次批内试验的荧光信号循阈值(Ct值)变异系数(CV)分别为1.60%、0.70%,2次批间试验的变异系数(CV)分别为0.40%、0.40%,均在5%以下.结论 本研究建立的实时定量RT-PCR检测诺如病毒基因Ⅱ型的方法,其灵敏度、特异性和重复性良好,可用于该病毒的快速检测.
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关 键 词: | 诺如病毒 基因Ⅱ型 逆转录PCR 实时荧光定量RT-PCR |
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