| 藤黄微球菌Rpf基因的克隆表达及纯化鉴定 |
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| 引用本文： | 樊爱琳,师长宏,苏明权,薛莹,柏银兰,马静,刘家云,张建芳,程晓东,郝晓柯. 藤黄微球菌Rpf基因的克隆表达及纯化鉴定[J]. 医学争鸣, 2008, 29(4): 338-341 |
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| 作者姓名： | 樊爱琳 师长宏 苏明权 薛莹 柏银兰 马静 刘家云 张建芳 程晓东 郝晓柯 |
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| 作者单位： | 第四军医大学,西京医院检验科,陕西,西安,710033;第四军医大学,实验动物中心,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部微生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,西京医院中医科,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:克隆藤黄微球菌Rpf基因,序列测定正确后进行融合表达纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法,从藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化.结果:获得藤黄微球菌Rpf基因,得到融合6个组氨酸残基的藤黄微球菌Rpf蛋白,可溶性分析发现融合蛋白主要在包涵体中存在,最后在变性条件下,用Ni2 -NTA 亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的融合蛋白纯度大于90%,Western-Blot证实获得的蛋白为所需要的目的蛋白.结论:构建了藤黄微球菌Rpf基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 微球菌 藤黄 分枝杆菌 结核 克隆 分子 基因表达 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2790（2008）04-0338-04 |
| 收稿时间： | 2007-07-17 |
| 修稿时间： | 2007-08-31 |
Cloning, purification and identification of Micrococcus luteus Rpf gene |
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| FAN Ai-Lin,SHI Chang-Hong,SU Ming-Quan,XUE Ying,BAI Yin-Lan,MA Jing,LIU Jia-Yun,ZHANG Jian-Fang,CHENG Xiao-Dong,HAO Xiao-Ke. Cloning, purification and identification of Micrococcus luteus Rpf gene[J]. Negative, 2008, 29(4): 338-341 |
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| Authors: | FAN Ai-Lin SHI Chang-Hong SU Ming-Quan XUE Ying BAI Yin-Lan MA Jing LIU Jia-Yun ZHANG Jian-Fang CHENG Xiao-Dong HAO Xiao-Ke |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | micrococcus luteus mycobacterium tuberculosis cloning, molecular gene expression purification |
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