Survivin蛋白的原核表达及在肿瘤诊断中的初步应用研究

目的实现Survivin蛋白在大肠杆菌BL21中的可溶性表达,建立基于Survivin蛋白的Survivin抗体检测方法,为survivin的深入研究及肿瘤的早期诊断奠定基础。方法从食管癌细胞Eca109中提取RNA,经RT-PCR扩增,克隆出Survivin基因;用PCR将Survivin克隆至载体pET32a( );用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定;IPTG诱导Survivin蛋白表达,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定;建立基于重组融合蛋白的Survivin抗体检测方法,并对肿瘤和癌前病变患者血清进行检测。结果构建了Survivin蛋白原核表达载体pET32a( )/Survivin/BL21,实现了Survivin蛋白在大肠杆菌BL21中的可溶性表达;建立了检测Survivin特异性抗体的间接ELISA,对44份健康血清1、42份肿瘤患者血清1、86份癌前病变患者血清进行了检测,结果显示:anti-Survivin在肿瘤患者中的检出率为32%,特异性为88%;anti-Survivin阳性率与年龄和性别无关(P>1.0,P>0.912);在69例消化系统肿瘤中,血清anti-Survivin阳性率32%;186例癌前病变患者anti-survivin阳性率31.7%,AFP和CEA阳性率分别为10.8%和16.7%(χ2=28.0705,P<0.005);在消化性溃疡患者,anti-survivin和CEA阳性率均为33.3%;在直肠息肉中anti-survivin阳性率33.3%,CEA阳性率仅为5.6%(χ2=34.309,P<0.005);在慢性结肠炎患者,anti-survivin阳性率40%,CEA阳性率20%(χ2=13.41,P<0.005)。结论本研究获得的Survivin蛋白和建立的Survivin抗体检测方法,为survivin作为肿瘤标志物的深入研究奠定了重要基础。

Expression, purification and initial application of survivin protein carcinoma diagnosis