| FcεR Ⅰ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定 |
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| 引用本文： | 宋晓妮,王穗海,曲焕,王萍,魏伟,王文敬,董文其.FcεR Ⅰ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定[J].热带医学杂志,2008,8(5):416-420. |
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| 作者姓名： | 宋晓妮 王穗海 曲焕 王萍 魏伟 王文敬 董文其 |
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| 作者单位： | 南方医科大学生物技术学院生物制药系,广州,510515 |
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| 摘 要： | 目的 通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FeεR Ⅰα亚基,并用重组蛋白制备单克隆抗体.方法 用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεR Ⅰα蛋白基因,经T-A克隆、亚克隆至pET28a( )原核表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),IPTG诱导表达FeεR Ⅰα亚基蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白;并用其免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗FcεR Ⅰα亚基单克隆抗体,用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定.结果 成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因,且测序正确;构建原核表达质粒FcεR Ⅰα-pET28a( );成功建立4株稳定分泌抗FcεR Ⅰα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为G101、C22、G113、G42.通过细胞免疫荧光实验证实,4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεR Ⅰα亚基.结论 成功利用基因重组技术制备了FcεR Ⅰα亚基蛋白,制备了4株效价高、特异性好的抗FcεR Ⅰα亚基单克隆抗体,为FeεR Ⅰα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | IgE FcεRⅠα亚基 单克隆抗体 |
| 文章编号： | 1672-3619(2008)05-0416-04 |
| 修稿时间： | 2008年1月20日 |
Prokaryotic Expression of FcεR Ⅰα Chain and Preparation and Characterization of the Monoclonal Antibody against FcεR Ⅰα Chain |
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| SONG Xiao-ni,WANG Sui-hai,QU Huan,WANG Ping,WEI Wei,WANG Wen-jing,DONG Wen-qi.Prokaryotic Expression of FcεR Ⅰα Chain and Preparation and Characterization of the Monoclonal Antibody against FcεR Ⅰα Chain[J].Journal Of Tropical Medicine,2008,8(5):416-420. |
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| Authors: | SONG Xiao-ni WANG Sui-hai QU Huan WANG Ping WEI Wei WANG Wen-jing DONG Wen-qi |
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