| 生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立 |
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| 引用本文： | 王维刚,王志刚,张永彦,费俭,郑起.生长激素促分泌素受体基因敲除小鼠胚胎干细胞的建立[J].中国普外基础与临床杂志,2008,15(10). |
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| 作者姓名： | 王维刚 王志刚 张永彦 费俭 郑起 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学附属第六人民医院普外科,上海,200233
2. 上海南方模式生物研究中心,上海,201210 |
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| 摘 要： | 目的建立生长激素促分泌素受体（ghrelin receptor，GHS-R）基因敲除小鼠胚胎干细胞（ES细胞）杂合子模型，为研究GHS—R基因的功能奠定基础。方法用TK-neo置换原X-pPNT载体的PGK—neo构建目标载体。以小鼠基因组DNA为模板，用PCR方法扩增2条同源臂，将其按照一定方向装入含有TK—neo的X—pPNT载体，并测序鉴定。载体线性化及纯化后电穿孔转染小鼠ES细胞，用G418和更昔洛韦（Gancyclovir）对电穿孔转染后的ES细胞进行正、负筛选培养，得到双药抗性ES细胞，克隆后抽提基因组DNA，分别用PCR方法鉴定2条同源臂，并测序确定成功同源重组的ES细胞克隆。结果改建X—pPNT载体成功，PCR获得2条同源臂片段，测序正确，并按一定方向装入打靶载体，ES细胞转染后经双药筛选得到328个阳性ES细胞克隆，PCR及测序鉴定证实3个克隆发生同源重组。结论本研究成功获得了GHS-R（-／＋）杂合子小鼠ES细胞克隆，为进一步通过显微注射及杂交育种获得GHS—R基因敲除小鼠打下了基础。
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| 关 键 词： | 基因敲除 胚胎干细胞 生长激素促分泌素受体 |
Generation of Mouse Embryonic Stem Cell Clones for Ghrelin Receptor Gene Knock Out |
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| WANG Wei-gang,WANG Zhi-gang,ZHANG Yong-yan,FEI Jian,ZHENG Qi.Generation of Mouse Embryonic Stem Cell Clones for Ghrelin Receptor Gene Knock Out[J].Chinese Journal of Bases and Clinics In General Surgery,2008,15(10). |
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| Authors: | WANG Wei-gang WANG Zhi-gang ZHANG Yong-yan FEI Jian ZHENG Qi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gene knock out Embryonic stem cell Ghrelin receptor |
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