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| 人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化 | |
| 引用本文： | 宋海晶,张卓梅,邱伟成,杨小盼,万德友,何椿鹏,李萌萌,高新. 人GPC3基因真核表达载体的构建及重组蛋白表达纯化[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28(9): 937-939,943 |
| 作者姓名： | 宋海晶 张卓梅 邱伟成 杨小盼 万德友 何椿鹏 李萌萌 高新 |
| 作者单位： | 1. 解放军第306医院急诊部,北京,100105 2. 武警总医院妇产科,北京,100039 3. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室,北京,100850 4. 解放军第306医院急诊部,北京100105;军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室,北京100850 |
| 摘 要： | 目的:人磷脂酰肌醇蛋白3是肝癌的诊断标志物和潜在治疗靶点。本研究目的在于获得足量的GPC3蛋白用于结构、功能及应用研究。方法:通过RT-PCR从人胎肝中克隆GPC3编码cDNA,利用Xho I和Xba I酶切位点,将GPC3ORF编码基因插入毕赤酵母表达载体pPICZ A中,构建真核表达质粒pPICZ A-GPC3。以该表达质粒转染毕赤酵母菌株GS115,在含有Zeocin的YPD平板上进行筛选。然后使用HRP标记的山羊抗人IgG在醋酸-硝酸纤维素双层膜上进行Dot blot筛选。对筛选获得的菌株进行诱导表达,表达上清经SDS-PAGE和Western blot检测。结果:筛选获得的阳性菌株诱导表达上清SDS-PAGE结果表明在预期位置观察到GPC3重组蛋白条带,且该蛋白条带与抗GPC3单克隆抗体(mAb)孵育后呈现特异性反应。工程菌株经高密度培养后,发酵上清中重组GPC3表达量约5 mg/L,进而通过阳离子交换层析从发酵上清中纯化了重组蛋白。结论:利用毕赤酵母表达并纯化了重组人GPC3蛋白,为进一步研究GPC3的结构和功能奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 人磷脂酰肌醇蛋白3 克隆 毕赤酵母 表达 纯化 肝癌 |
Construction of eukaryotic plasmid of human GPC3 and expression and purification of recombinant GPC3 protein |
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| SONG Hai-jing , ZHANG Zhuo-mei , QIU Wei-cheng , YANG Xiao-pan , WAN De-you , HE Chun-peng , LI Meng-meng , GAO Xin. Construction of eukaryotic plasmid of human GPC3 and expression and purification of recombinant GPC3 protein[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2012, 28(9): 937-939,943 | |
| Authors: | SONG Hai-jing ZHANG Zhuo-mei QIU Wei-cheng YANG Xiao-pan WAN De-you HE Chun-peng LI Meng-meng GAO Xin |
| Affiliation: | 1,3 1Department of Emergency Medicine,PLA 306th Hospital,Beijing 100105;2Department of Gynaecology and Obstetrics,General Hospital of People’ s Armed Police Forces,Beijing 100039;3Department of Pharmacology and Toxicology,Institute of Radiation Medicine,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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