马钱苷在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制

目的探究马钱苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）的保护效果及作用机制。方法采用线栓法构建SD大鼠CIRI模型，分为假手术组、CIRI组、CIRI+马钱苷低剂量（5mg/kg）组、CIRI+马钱苷中剂量（10mg/kg）组、CIRI+马钱苷高剂量（15mg/kg）组，其中假手术组仅分离颈总动脉、颈外动脉，不进行栓塞。CIRI+马钱苷低、中、高剂量组分别给予不同剂量马钱苷，假手术组与CIRI组给予0.9%氯化钠溶液，连续给药7d。TTC法、Tunel染色法观察大鼠脑组织梗死率和神经细胞凋亡情况；ELISA法测定大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量。采用氧糖剥夺/复氧（OGD/R）法构建神经瘤母细胞（N2a）CIRI模型，分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+马钱苷低剂量（10μmol/L）组、OGD/R+马钱苷中剂量（20μmol/L）组和OGD/R+马钱苷高剂量（30μmol/L）组，干预24h。乳酸脱氢酶（LDH）法测定细胞LDH释放率，流式细胞术测定细胞凋亡情况。qRT-PCR法分别测定各组大鼠脑组织和各组N2a中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2关联X基因（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达水平，Westernblot法分别测定各组大鼠脑组织和各组N2a中NF-κB、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38/p38）、活化Caspase-3/Caspase-3（cleaved-Caspase-3/Caspase-3）蛋白表达水平。结果与假手术组相比，CIRI组大鼠脑梗死率和神经细胞凋亡率升高（均P＜0.01），血清IL-1β、IL-6和TNF-α质量浓度均升高（均P＜0.01），Bcl-2mRNA表达水平降低（P＜0.01），Bax、Caspase-3mRNA和NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.01）；相比CIRI组，CIRI+马钱苷中、高剂量组大鼠脑梗死率和神经细胞凋亡率均下降（均P＜0.05），血清IL-1β、IL-6和TNF-α质量浓度均降低（均P＜0.05），NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达均降低（均P＜0.05）；CIRI+马钱苷低、中、高剂量组Bcl-2mRNA表达水平均升高（均P＜0.05），Bax、Caspase-3mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）。与正常对照组相比，OGD/R组细胞LDH释放率和凋亡率均增加（均P＜0.01），Bcl-2mRNA表达水平降低（P＜0.05），Bax、Caspase-3mRNA和NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.01）；相比OGD/R组，OGD/R+马钱苷中、高剂量组细胞LDH释放率和凋亡率均降低（均P＜0.01），NF-κB、p-p38/p38、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均降低（均P＜0.05）；OGD/R+马钱苷低、中、高剂量组Bcl-2mRNA表达水平均升高（均P＜0.05），Bax、Caspase-3mRNA表达水平均降低（均P＜0.05）。结论马钱苷可通过调控p38/NF-κB信号通路抑制炎症反应，减少神经细胞凋亡来改善体内外CIRI。