表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立

目的 建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型，对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测，为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法 以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列，获得EGFP的编码基因，将扩增产物克隆到载体pALACE上，建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中，通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆，扩大培养后涂片观察，并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞，观察是否有GFP表达。结果 正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌，证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达，并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论 表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立，为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。