| 血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达 |
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| 引用本文： | 朴君,武翼,朴敬爱,李文哲. 血管内皮细胞黏附分子胞外区基因真核表达载体构建及表达[J]. 免疫学杂志, 2013, 0(2): 156-160 |
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| 作者姓名： | 朴君 武翼 朴敬爱 李文哲 |
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| 作者单位： | 辽宁师范大学生命科学学院;大连大学免疫学研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30972675,31270864);大连市科技计划项目(2010J21DW011) |
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| 摘 要： | 目的构建并表达血管内皮细胞黏附分子(VCAM-1)胞外区基因真核表达载体。方法从小鼠NIH/3T3细胞提取总RNA,以其为模板通过RT-PCR扩增VCAM-1胞外区(D1-D4结构域)cDNA。利用PCR获得VCAM-1胞外区基因,连接pMD19-T载体,进行基因序列测序。将VCAM-1 D1-D4目的片段插入到真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc中,构建重组真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1。经双酶切鉴定VCAM-1胞外区基因真核表达载体构建的成功与否。利用脂质体把pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1导入至人B淋巴性白血病细胞株(Raji)内。结果基因测序结果表明成功扩增出VCAM-1胞外区基因,双酶切鉴定表明重组的真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1构建成功。Western blot结果显示导入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒的Raji细胞中VCAM-1高表达。细胞结合实验表明,表达的VCAM-1与前B细胞(70Z/3)表面的VLA-4特异性结合。结论 VCAM-1真核表达载体构建及表达成功,为前B细胞克隆形成机理以及为B细胞分化发育研究提供实验依据。
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| 关 键 词： | 血管内皮细胞黏附分子 真核表达载体 真核表达 |
Construction and expression of the eukaryotic expression vector of VCAM-1 extracellular domains |
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| PIAO Jun,WU Yi,PIAO Jingai,LI Wenzhe. Construction and expression of the eukaryotic expression vector of VCAM-1 extracellular domains[J]. Immunological Journal, 2013, 0(2): 156-160 |
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| Authors: | PIAO Jun WU Yi PIAO Jingai LI Wenzhe |
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| Affiliation: | 1.School of Life Science,Liaoning Normal University,Dalian 116081,China;2.Institute of Immunology,DaLian University,Dalian 116622,China |
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